前言： 做生物分析，最怕“红红的”。面对溶血样本，你是硬着头皮做，还是直接标记弃用？（最好是拒收啊）。

溶血对液质分析的影响，远不止增加基质复杂度那么简单。今天，我们聊聊溶血背后那些看不见的“数据杀手”。

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1. 痛点：为什么溶血是质谱方法的死穴？

有这样的切实感受，在看审稿人问题时，最怕审稿人问的一句话就是：“你们的方法是否验证了溶血样本的准确性？”

要说这并非刁难。溶血意味着红细胞破裂，细胞内的物质（血红蛋白、各种酶、细胞内液）大量释放进入血浆。对于 LC-MS/MS 而言，这会带来两个大问题：

严重的基质效应： 释放出的磷脂、蛋白质和盐类会严重干扰电离。

释放“生化武器”——酶促降解： 这是最隐蔽的一点。许多化合物在普通血浆中很稳定，但在溶血样本中会迅速消失。

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2. 深度原理：当药物遇上“细胞内酶”

我们在方法开发时，为了追求快点，往往会重点关注基质抑制程度，却忽视了稳定性的变化。

一个典型的案例： 如果你测定的是一个酯类药物或含有酰胺键的化合物，红细胞破裂释放出的酯酶（Esterases）或蛋白酶浓度会瞬间升高。 这些酶像一把把微小的“剪刀”，在你的样本离开采集室到进入冷冻柜的短短几分钟内，就把你的药物“剪”碎了。

结果： 你的 LLOQ 响应消失，或者测得的浓度远低于真实值，且这种损失是不可逆的。

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3. 三步诊断法：如何定量评价“红”的危害？

只凭肉眼看“浅红、深红”是不够专业的。可以这样评估溶血：

溶血样验证：在方法验证阶段，人为制造 2% 溶血（在血浆中加入 2% 体积的破裂全血）的基质（最靠谱）。

对比实验： 准备六个不同来源的正常血浆和两份溶血血浆。对比它们的基质因子（Matrix Factor）。如果溶血样本的内标归一化 MF偏离出 0.8-1.2，说明基质效应不可控。

溶血稳定性实验： 在溶血基质中加入药物，考察其在冰浴、室温及反复冻融下的稳定性。这能判断药物是否被“吃”掉了。

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4. 专家对策：如何驯服溶血样本？

如果你的临床样本已经“红”了，以下是一些建议的补救方案：

A. 加入“抑制剂”（封印）

如果是因为酶降解，可以在采样管中提前加入酸（如甲酸、柠檬酸）或酶抑制剂（如 NaF, Vaborbactam）。通过改变 pH 或灭活酶活性，保住药物的原始浓度。也要根据不同的化合物特性，进行选择。

B. 优化前处理（去杂质）

蛋白沉淀（PPT）不够，就上固相萃取（SPE）： 溶血样本含氮量高，SPE 柱能有效去除血红蛋白带来的干扰。本号有众多Spe内容，欢迎号内搜索，

稀释大法： 如果灵敏度允许，增加稀释倍数是抵御溶血基质效应最简单有效的方法。（更多内容，可以号内搜索基质效应）

C. “同位素内标”是最终防线

在溶血样本分析中，SIL-IS（稳定同位素标记内标）不再是可选项，而是必选项。只有结构完全一致的内标，才能补偿溶血带来的瞬时离子压制。

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结语

溶血样本的分析，是考验一个我们开发出来的方案“底蕴”有多厚的试金石。它不仅仅是颜色问题，更是酶化学与分析化学的交叉博弈。