前言：在生物分析实验室，最让人崩溃的瞬间，莫过于进样后看到满屏的峰分叉或峰展宽。你第一反应是不是：柱子塌陷了？还是进样针堵了？ 先别急着下结论！今天我们要聊的，是一个极易被忽视、却在方法开发中极其高发的“隐形杀手”——溶剂效应（Solvent Effect）。
在进行大批量生物样本（如血浆、尿液）分析时，我们常采用乙腈或甲醇进行蛋白质沉淀。为了提高灵敏度，很多同学习惯直接取处理后的上清液进样。 结果发现：前段洗脱的化合物峰形稀烂，有的像马鞍，有的直接分裂成两个峰；而后面洗脱的化合物却峰形完美。
简单来说，当你的样品溶剂（Sample Solvent）的洗脱强度显著高于液相系统的初始流动相（Initial Mobile Phase）时，溶剂效应就发生了。洗脱过快： 样品随强溶剂进入色谱柱后，局部溶剂强度过高，导致部分目标分子还没来得及在固定相上“站稳脚跟”，就被强溶剂推着往前跑了。速度差异： 靠近色谱柱中心的分子跑得快，靠近柱壁的分子受阻力跑得慢，最终导致化合物带在柱内发生严重的纵向扩散。结果： 这种时间上的“跑偏”反映在色谱图上，就是难看的峰分叉或宽峰。
不要直接进纯乙腈处理后（或蛋白沉淀）的上清液！尝试用水或初始流动相对样本进行稀释（如1:1或1:2）。Tips： 如果担心稀释导致灵敏度下降，可以尝试增加进样体积。你会惊奇地发现，稀释后进20μL的峰形，往往比直接进5μL强溶剂样本的峰形更尖锐、响应更高。如果必须使用强溶剂，请务必压缩进样体积（通常建议控制在1-5μL以内）。体积越小，强溶剂被流动相稀释的速度就越快，对峰形的影响越小。适当提高初始流动相中有机相的比例，缩小其与样品溶剂之间的“代沟”。但需注意，这可能会牺牲极性化合物的保留。如果你的自动进样器支持，可以在进样程序中设置：先吸一段水，再吸样品，再吸一段水。让样品在进入色谱柱前，在管路中完成“在线稀释”。
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