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为什么你的色谱峰会分叉?

来源:本站      2025-12-19
导读:NO 1:裂峰判定思路01):是否没分开:峰形异常可能由多种因素引起,且某些情况可通过简单调整得以解决,但根本原因仍需明确识别。首要任务是判断观察到的是否为单个变形峰(可能源于装填问题或床层完整性受损),或是两个未完全分离的化合物共存。02):经验法则:若仅有一个峰出现分裂,则问题更可能与方法条件或化学因素相

NO 1:裂峰判定思路


01):是否没分开:峰形异常可能由多种因素引起,且某些情况可通过简单调整得以解决,但根本原因仍需明确识别。


首要任务是判断观察到的是否为单个变形峰(可能源于装填问题或床层完整性受损),或是两个未完全分离的化合物共存。


02):经验法则:若仅有一个峰出现分裂,则问题更可能与方法条件或化学因素相关,而非装填缺陷或硬件故障。

改变进样量、调整色谱梯度,以研究峰分裂/变形峰的比例变化,也可帮助判断是否存在两个未完全分离的组分。

2.png

NO 2:裂峰常见原因


01)填料装填不好导致的沟流现象或柱床顶层空隙(下图一)


02)与色谱柱硬件相关的可能因素包括流路局部阻塞


03)进样筛板堵塞


04)某些填料的疏水特性在特定条件下可能诱发峰分裂


05)目标物自身的聚集行为


06)电荷差异也可能是峰分裂的直接诱因


如下所示:流路的沟渠效应,会导致保留时间变化,且峰分叉。

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色谱填料前端的填料流式,可能导致明显的肩峰现象

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色谱筛板或预柱的堵塞,可能导致明显的峰拖尾

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NO 3: 待测物特异性


除去上述原因之外,还需关注分析物的特性导致的峰分叉问题:

01)某一类的分子,如具有两性特性的小分子有机分析物(如有氨基和羧基等不同的官能团),和大分子分析物(多肽和蛋白等)有时容易表现出峰分裂。这些分子具有多种类型的分子内和分子间相互作用,受pH值的影响较大,在特定条件下容易形成二聚体或更大的聚集体。

02)目标分子的电荷差异也可能导致峰分裂。这种电荷差异可能来源于原料,也可能由分析过程中的运行条件所诱发。多肽中哪些氨基酸容易导致峰异常?

简单来说就是酸性氨基酸如天冬氨酸,谷氨酸,碱性氨基酸如赖氨酸,精氨酸。

解决:针对此类现象,可以通过调整pH值、离子强度(流动添加剂)、温度等条件。

比如,在生物分析中,环孢素类的分析物,通过调整高的柱温可以解决色谱峰分叉,拖尾的现象。在多肽的分析过程中,可以通过调整柱温,解决部分氨基酸导致的峰异常问题。

TAG标签: 色谱峰

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本文最后更新于2025-12-19 16:12:47,如果你的问题还没有解决,可以加入交流群和群友们一起讨论。